高中生物實(shí)驗(yàn)：DNA的粗提取與鑒定

2016-09-06 10:38:06文/劉楠

高中生物學(xué)習(xí)中掌握重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)是生物學(xué)習(xí)方法中最有效的一種，生物實(shí)驗(yàn)掌握之后在學(xué)習(xí)起來(lái)會(huì)變的輕松很多，下面是高三網(wǎng)小編整理的高中生物實(shí)驗(yàn)之DNA的粗提取與鑒定，希望對(duì)高中生的生物學(xué)習(xí)有幫助。

DNA的粗提取與鑒定知識(shí)

1.DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)原理

(1)粗提取原理：在NaCl溶液濃度低于0.14mol/L時(shí)，DNA的溶解度隨NaCl溶液濃度的增加而降低;在0.14mol/L時(shí)，DNA的溶解度最小;當(dāng)NaCl溶液濃度繼續(xù)增加時(shí)，DNA溶解度又增大。

(2)純化原理：DNA不溶于酒精，但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精。

(3)鑒定DNA原理：在沸水浴條件下，DNA遇二苯胺會(huì)被染成藍(lán)色。

2.實(shí)驗(yàn)材料的選擇及處理

(1)不選擇豬血等哺乳動(dòng)物的血液，因?yàn)椴溉閯?dòng)物成熟的紅細(xì)胞無(wú)細(xì)胞核。

(2)需要在雞血中加入抗凝劑——檸檬酸鈉溶液，防止血液凝固。

(3)需除去雞血中的血漿，因?yàn)檠獫{中無(wú)DNA。

特別提醒：不同生物的組織中DNA含量不同在選取材料時(shí)，應(yīng)本著DNA含量高、材料易得、便于提取的原則。

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3.生物實(shí)驗(yàn)過(guò)程

步驟：提取細(xì)胞核物質(zhì)→溶解核內(nèi)DNA→析出DNA粘稠物→濾取含DNA的粘稠物→DN A粘稠物的再溶解→過(guò)濾含有DNA的氯化鈉溶液→提取含雜質(zhì)較少的DNA→DNA的鑒定。

操作要點(diǎn)：(1)2次加蒸餾水：第一次是在是為了使血細(xì)胞吸水膨脹破裂，加水后必須充分?jǐn)嚢枋寡?xì)胞充分破裂;第二次加蒸餾水是為了稀釋氯化鈉溶液。

(2)3次加氯化鈉溶液：第一次加氯化鈉后，必須充分晃動(dòng)燒杯，使二者混合均勻，加速染色質(zhì)中DNA與蛋白質(zhì)分離，使DNA充分游離并溶解在氯化鈉溶液中;第二次加氯化鈉溶液也是為了DNA的再溶解，這時(shí)溶液中的蛋白質(zhì)含量已很少;第三次加氯化鈉溶液還是為溶解DNA。

(3)6次攪拌：除最后一次攪拌外前5次攪拌均朝一個(gè)方向:，并且在析出DNA、DNA再溶解和提取中，各步攪拌都要輕緩玻璃棒，不要直插燒杯底部防止DNA分子斷裂。

(4)3次過(guò)濾：第一次過(guò)濾，留濾液;第二次過(guò)濾，留粘稠物;第三次過(guò)濾，留濾液。注意這3次過(guò)濾都用紗布，獲得沉淀物或粘稠物的通常為多層，獲得濾液的紗布層數(shù)適當(dāng)減少。

特別提醒：若以植物為實(shí)驗(yàn)材料，步驟上大致相同，在材料的處理上有幾點(diǎn)不同：一是增加研磨步驟，目的是破壞細(xì)胞壁;二是加入洗滌劑，目的是溶解細(xì)胞膜及核膜;三是加食鹽，可加速細(xì)胞膜及核膜的破裂。

4.DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

(1)用冷酒精濃縮和沉淀DNA時(shí)所用的95%酒精，必須經(jīng)過(guò)充分預(yù)冷后才能使用，冷酒精與含 DNA的氯化鈉溶液體積比是2：1 。如果用冷酒精處理后，懸浮于溶液中的絲狀物較少，可將混合液放于冰箱中再冷卻幾分鐘，然后再用玻璃棒卷起絲狀物。

(2)雞血細(xì)胞破碎以后釋放的DNA，容易被玻璃容器吸附，由于細(xì)胞內(nèi)DNA的含量本來(lái)就比較少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的DNA就會(huì)更少。因此，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中最好使用塑料的燒杯和試管，這樣可以減少提取過(guò)程中DNA的損失。

以上是高三網(wǎng)小編整理的高中生物實(shí)驗(yàn)之DNA的粗提取與鑒定，供參考，希望小編整理的DNA的粗提取與鑒定對(duì)同學(xué)們的生物學(xué)習(xí)有幫助。